2013-08-14
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中藥洗劑中苦參堿的含量液相色譜測(cè)定
摘要：苦參總生物堿中含有苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿等生物堿類成分，苦參堿的含量測(cè)定有報(bào)道用氣相色譜法、液相色譜法（HPLC），但樣品處理方法較復(fù)雜。2006年采用HPLC法測(cè)定制劑中苦參堿的含量，該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于婦得康洗劑的質(zhì)量控制。
1儀器和試藥
液相色譜LC-6A（日本島津）；TCQ-250超聲波清洗儀（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）；電子天平AEG-220（日本島津）；紫外分光光度儀UV-265（日本島津）；甲醇為優(yōu)級(jí)純；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)：110805-200306）。婦得康洗劑由貴陽(yáng)舒美達(dá)制藥廠有限公司提供（批號(hào)：20041001、20041002、20041003、20041004、20041101、20041102、20041103、20041201、20041202、20041203）。
2方法與結(jié)果
2．1色譜條件
DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm；流速1ml/min；柱溫25℃。
2．2供試品溶液的制備
取本品50ml，搖勻，精密量取5ml，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，用氯仿（30、30、30、20、20ml）提取5次，合并提取液，揮干氯仿，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò)，濾渣、容器用甲醇洗滌3次，每次5ml，合并洗液與濾液，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
2．3對(duì)照品溶液的制備
取經(jīng)P2O5減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每毫升約含0.530mg的對(duì)照品溶液。
2．4陰性對(duì)照品溶液的制備
取缺苦參總生物堿的樣品適量，依供試品溶液的制備法，制備陰性對(duì)照品溶液。
2．5系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
分別取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。理論塔板數(shù)為8128。
2．6線性關(guān)系考察
精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，依對(duì)照品溶液制備法制備濃度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954g/L的溶液，分別精密吸取上述溶液5μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=38788X－53（r=0.9998），表明苦參堿在0.53~4.77μg呈線性關(guān)系。
2．7精密度試驗(yàn)
精密吸取上述苦參堿對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定苦參堿峰面積，RSD為1.58%，表明精密度良好。
2．8穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密量取本品適量，依供試品溶液制備法制備供試品溶液，再精密吸取供試品溶液10μl，依上述色譜條件在0、2、4、6、8h分別進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，RSD為1.49%，表明供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2．9重復(fù)性試驗(yàn)
分別精密量取同一樣品5份，依供試品溶液制備法制備5份供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10μl，依上述色譜條件測(cè)定，RSD為0.95%，表明該方法的重復(fù)性良好。
2．10加樣回收率試驗(yàn)
精密量取0.5ml已知含量（35.767g/L）的婦得康洗劑5份，分別添加苦參堿對(duì)照品適量，按上述供試品溶液制備法制備加樣回收供試品溶液，并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。結(jié)果苦參堿的平均回收率為98.6%，RSD為1.17%。
2．11樣品測(cè)定
精密量取樣品適量，依供試品溶液制備法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl與供試品溶液10μl注入液相色譜儀，依上述色譜條件測(cè)定，記錄苦參堿峰面積，重復(fù)測(cè)定2次，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。表1苦參堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果210批樣品中苦參堿的含量
3討論
3．1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
精密稱取干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)溶液在200nm處有zui大吸收，考慮紫外吸收末端干擾大，且樣品中苦參堿含量高，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。
3．2流動(dòng)相的選擇
選擇了3種流動(dòng)相：（1）乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（1∶9），氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0；（2）乙腈-0.005mol/L庚烷基磺酸鈉溶液（25∶75）；（3）乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）。經(jīng)多次測(cè)試結(jié)果表明，流動(dòng)相（1）峰分離不好，流動(dòng)相（2）的峰型不好，出現(xiàn)脫尾現(xiàn)象，流動(dòng)相（3）出峰時(shí)間合理，峰型好，分離度大于1.5。
3．3萃取次數(shù)的考察
取婦得康洗劑5ml，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，分別用氯仿（30、30、30、20、20、20ml）提取3、4、5、6次，合并提取液，揮干氯仿，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò)，濾渣，容器用甲醇洗滌3次，每次5ml，合并洗液與濾液，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，通過(guò)比較峰面積，5次萃取基本可將苦參堿萃取*。
3．4根據(jù)對(duì)10批樣品的測(cè)定值，暫定本品含苦參總生物堿以苦參堿（C15H24N2O）計(jì)，每瓶不得少于0.24g。
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